Human MSC Chondrogenic Differentiation Kit

Catalog Number: RS001-05

Storage Temperature:

- Chondrogenic Basal Medium(RS001-05M): 4°C

- Chondrogenic 10x Supplement(RS001-05S): -20°C

제품설명

본 제품은 인간 중간엽줄기세포(Human Mesenchymal Stem Cell, hMSC)를 성숙한 연골세포(Chondrocyte)로 안정적이고 효과적으로 분화시키기 위해 개발된 연골분화 전용 키트입니다.

본 키트는 최적의 영양 성분이 배합된 Basal Medium과 고농축 분화 유도 물질이 포함된 10x Supplement로 구성되어 있습니다.

연구자 개별 제조에 따른 배치(Batch) 간 편차를 최소화하고, 펠렛(Pellet) 및 스페로이드 배양 환경에서 3D 세포 외 기질(GAG, II형 콜라겐) 형성 및 연골분화 표지 유전자 발현을 강력하게 촉진하도록 설계되었습니다.

분화 과정 중 발생할 수 있는 비후화(Hypertrophy) 현상 및 세포 독성을 최소화하고 정교한 미세환경을 제공하여, 퇴행성 관절염 신약 스크리닝, 연골 조직 재생, 조직공학적 스캐폴드 평가 등 다양한 응용 연구에 신뢰성 높은 연골세포 모델을 제공합니다.

보관 및 안정성

Human MSC Chondrogenic Differentiation Kit는 최상의 상태를 유지하기 위해 Basal Medium은 4°C 냉장 보관하며, 10x Supplement는 냉동조건(-20°C)에서 보관해야 합니다.

10x Supplement는 사용 직전 해동하여 사용하시길 권장하며, 특히 제품 성분이 변질되는 것을 방지하기 위해 반복적인 해동과 재동결 과정은 반드시 피해야 합니다. 필요 시 소분하여 보관하는 것을 권장합니다.

Basal Medium과 10x Supplement를 혼합한 Complete Medium은 2~8°C 냉장 상태에서 차광하여 보관하시고, 최상의 분화 효율을 위해 조제 후 2~3주 이내에 사용하시는 것을 권장합니다.

개봉 후에는 오염 방지를 위해 무균 상태에서 신속히 사용하시는 것을 권장합니다.

제품의 변성은 (1) 침전물 또는 부유물, (2) 용액의 탁해짐, (3) 색의 변화 등으로 나타날 수 있습니다.

각 제품의 유효기간은 제품 라벨에 표시되어 있습니다.

생물학적 특성

Human MSC Chondrogenic Differentiation Kit의 생물학적 특성은 연골전구세포 및 중간엽줄기세포의 분화 유도율, 3D 펠렛 내 세포 외 기질(글리코사미노글리칸, Collagen Type II) 축적 효율, 그리고 대표적인 연골분화 표지 유전자 발현을 기준으로 엄격하게 평가됩니다.

먼저 분화 유도 후 형성되는 3D 펠렛의 크기 및 기질 형성 빈도를 기존 표준 제품들과 비교 분석하여 동등 이상의 성능을 나타내는지 확인합니다.

배양 과정에서는 현미경 관찰, Alcian Blue 염색 또는 Safranin O 염색 등을 통해 펠렛 내부의 정교한 프로테오글리칸 축적 양상과 형태학적 변화를 지속적으로 모니터링하여 품질의 일관성을 검증합니다.

또한 세포 독성 시험을 통해 배지 성분에 의한 부정적 영향이 없음을 철저히 확인하여, 안심하고 사용할 수 있는 품질을 보장합니다.

사용방법

1. 냉동 보관 중인 10x Supplement를 사용 직전 냉장(2~8°C) 또는 상온에서 완전히 해동합니다.

2. Basal Medium에 해동된 10x Supplement를 9:1 비율(최종 1x 농도)로 혼합하고, Gentamicin은 최종 농도가 5 μg/ml가 되도록 각각 첨가한 후 부드럽게 혼합하여 Complete Medium을 제조합니다.

(※일반적인 연골분화는 무혈관 환경을 모사하므로 FBS를 첨가하지 않습니다.)

3. 배양 중인 hMSC를 회수하여 세포 수를 측정하고, Micromass 배양을 위해 약 4.0x10⁴ cells/5μl drop 규격으로 V-bottom 또는 U-bottom 96-well plate에 분주합니다.

(※ Plate 외곽 well에 멸균수를 채워 증발을 방지하는 것을 권장합니다.)

4. 37°C, 5% CO₂ 인큐베이터에 추가적인 배지 첨가 없이 2시간동안 세포간 부착을 유도한 후 제조한 Complete Medium을 적정량 첨가합니다.

(※ 세포 덩어리가 흩어지지 않도록 plate well 벽면을 타고 조심스럽게 분주합니다.)

5. 2~3일마다 세포 덩어리(Micromass)가 손상되지 않도록 신선한 Complete Medium으로 배지를 교체하고, 현미경을 통해 3D 구조체의 크기 및 형태 변화를 모니터링 합니다.

6. 분화 유도 기간(통상 14~21일)이 완료되면 형성된 연골 조직을 회수하여 Alcian Blue 또는 Safranin O 염색 및 조직학적 분석, 유전자/단백질 분석 등 후속 실험을 진행합니다.