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제목 WELGENE 뉴스레터 VOL.8
글쓴이 웰진
날짜 2020-08-20 [10:06] count : 25
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NEWSLETTER
2020.08.19 VOL.8
국내 최대의 세포배양 전문기업 (주)웰진
20년간 최고 품질의 제품을 고객들에게 제공하고자 노력하였습니다.
지난 20년을 발판 삼아 고객과 소통하며, 국내를 넘어 세계로 도약하는 (주)웰진입니다.

동물 세포 배양의 역사 
 동물세포의 배양은 1907 Harrison이 올챙이의 척색에서 취한 신경선유세포를 개구리의 응고 림프액에 배양함으로써 시작되었습니다. 그 후 많은 연구자의 노력에 의하여 혈청과 조직 추출액에 무기염류, 아미노산, 비타민 등을 첨가함으로써 동물 세포를 배양기 안에서 재현성이 좋게 배양할 수 있게 되었으나, 20세기 중엽에 HeLa 세포를 비롯한 암화에 의한 세포주의 확립 방법이 수립되기 전까지만 해도 배양액이나 혈청 등 여러가지 문제로 인해 세포배양법은 연구자가 일반적으로 이용할 수 있는 방법이 되지 못했습니다.
 최근에는 세포주 수립 기술이 확립되고 각종기능을 가진 세포주가 만들어지면서, 혈청을 첨가하지 않고 인위적으로 성분을 첨가하여 구성성분을 이미 알고 있는 배지에 배양하는 무혈청 배양법이 Sato 등에 의해서 확립되었습니다. 현재 동물세포배양법은 새로운 생리활성물질의 발견, 생리활성물질의 생산 기술, 배양시스템의 개발, 천연 생리활성물질로부터 유도체의 제작, 치료용 세포의 생산 등에 이용되고 있으며 그 기술이 점점 더 발전하고 있습니다.
세포의 종류 및 특징  
 다음 표는 많이 이용되고 있는 있는 세포주 중 일부의 특징과 WelGENE에서 제공하고 있는 배양 배지 및 혈청을 나타낸 것입니다.

배지의 종류 및 개발 목적
BME (Basal Medium Eagle) 
BME는 1950년대에 Harry Eagle에 의해 HeLa 세포를 배양하는데 사용할 수 있도록 개발된 배지이다. BME는 세포가 성장하는데 필요한 필수 영양분 및 기타 요인들(무기염류와 비타민류)에 대한 연구의 결과로 얻어진 배지로 현재 널리 사용되고 있는 MEM DMEM의 기본 조성이 된 배지이다. 초기에는 이 배지가 WI-38 세포와 형질 전환된 mouse 세포 및 HeLa 세포의 단층 배양 성장을 연구하는데 사용되었으나 이후로 적절한 첨가제를 사용함으로써 좀 더 다양한 정상세포와 형질전환 세포의 배양에 적용할 수 있음이 보고되었다.    
DMEM (Dulbecco’s modified Eagle’s medium)
동물조직/세포배양을위해서 Eagle’s Medium처음문헌에발표된후로번의수정을통해발전되어왔다. DMEM MEM D-glucose (1000 mg/L 또는 4500 mg/L) 뿐만아니라고농도의 amino acids, vitamins첨가하여개발되었다.  
MEM (Minimum Essential Medium)
MEMHarry Eagle의해서개발된것으로현재부착성세포를비롯한여러종류의세포배양에널리사용되는배양액이다. 초기에개발된BME로는정상적인섬유아세포(fibroblast)특정HeLa세포를배양하는데있어영양분이부족하다는연구결과로인해이러한점이개선된MEM개발되었다.
RPMI1640
RPMI 1640혈구세포를in vitro에서장기간동안배양하기위해서 Moore at al.의해개발되었다. Rosewell Park Memorial Institute에서개발되어 RPMI라고명명하게되었으며, RPMI 1640 RPMI 1630 series조성을기본으로하여 bicarbonate buffering system도입하고 amino acids vitamins 양을변화시킨것이다. 또한 RPMI 1640 배지는 McCoy’s 5A배지를수정한것으로정상또는신생종양성 leukocyte 등의현탁성세포를배양하는데널리사용되고있다. 
DMEM/F-12
F-12 Nutrient Mixture (Ham’s F-12)무혈청배지로세포를배양할있도록개발된것으로여러연구자들은 insulin, transferring, epidermal growth factor (EGF), leutinizing hormone (또는 follicle stimulating hormone), somatomedin, 그리고성장호르몬등이포함된무혈청배지에서 Leydig 세포와 Sertoli 세포를성공적으로배양할있다고보고하였다. 특히 F-12 Nutrient Mixture Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM) 1:1혼합한배지가세포를혈청없이배양하는데매우효율적이라고알려져있다.
Ham's F-10 과 F-12
Chinese Hamster Ovary (CHO) 세포의클론성장(clonal growth) 위해1960년대에Ham, R.G.의해Ham’s nutrient mixture들이개발되었다. 배지들은혈청을대체하기위해영양소, 성장인자그리고호르몬들이첨가되어있어초기에는무혈청배지로사용되었고HeLa 세포와mouse L-세포의클론성장에도적합하며현재에는혈청을첨가하여다양한세포주를배양하는데사용하기도한다
Ham’s F-10 배지는human diploid cells, white blood cells성장에적합하여rat, rabbit, 그리고chicken 조직의초대배양유전자분석(chromosomal analysis) 등에사용될있다.    
Ham’s F-12 배지는rat hepatocytes초대배양(primary culture)rat prostate epithelial cell배양에사용된다. 특히Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM) 1:1비율로섞은DMEM/F-12 배지다양한초대배양에적용할있는무혈청배지로사용되기도한다. HEPES첨가로인해최적pH7.3 근방에서더욱효과적인완충작용을나타낸다.
세포배양에 필요한 장비 및 시설
  • 도립현미경(Inverted icroscopy)
  • CO2 Incubator
  • Clean bench
  • Water Bath
  • 배양용기
  • 액체질소 보존통
세포의 동결 보존과 해동
세포의 동결 보존
 세포 배양시 보통 일만개에 한 개의 비율로 돌연변이체가 생기며 장기간에 걸쳐 계대 배양을 계속하게 되면 본래의 세포 집단과는 전혀 다른 세포 집단으로 변할 수 있어 이러한 유전적 변이를 최소화하고 노화와 형질전환을 방지하는 등 세포주를 안정하게 보존하고 또한 오염에 의한 소실을 방지하기 위해서 세포의 동결 보존은 반드시 필요합니다.
 세포의 동결 보존시 세포에 내동성을 부여하기 위해서 dimethyl sulfoxide (DMSO) 또는 glycerol을 첨가하는데, glycerol 보다 DMSO가 더 효과가 있는 것으로 알려져 있으며 5 – 10% 농도로 배양배지에 첨가한 freezing medium을 많이 사용하지만 세포에 따라 농도는 달라질수 있습니다. DMSO는 세포에 독성을 나타낼 수 있으므로 동결 조작은 신속하게 해야 하며, 대수 증식기(log phase)에 있는 활성적인 세포를 이용하며 고밀도(5X106-1X10cells/ml)로 저장합니다. 동결시 감온 속도는 세포에 따라 다르나 보통 -1°C/min 속도로 동결하며,  Programmed cooler를 이용하거나 또는 솜 등을 채운 ice box를 사용할 때는 저장할 세포가 포함된 vial을 넣고 -70 ~ -90°C deep-freezer에 정치한 후 액체 질소로 옮김으로써 동결 보존을 완료할 수 있습니다액체 질소는 증발이 잘 되므로 정기적으로 그 수위를 검사하고 다시 채우는 등의 관리가 필요합니다.
동결 보존된 세포의 배양
 동결된 세포는 저온과 DMSO에 의한 장해를 피하기 위해서 신속히 조작할 필요가 있습니다. 액체 질소에 저장 상태인 동결 세포 vial은 액체 질소에서 외부로 나오는 즉시 37 - 40°C 정도의 수조에서 신속히 해동하고, 미리 준비한 배지에 세포 현탁액을 넣습니다. DMSO glycerol을 제거하고자 할 경우에는 80 xg에서 2 - 3 분간 원심하여 상청액을 버리고 새로운 배지에 세포를 현탁한 후 배양 용기에서 배양하며, 이때 보통의 계대 배양때보다 높은 세포 접종 밀도로 배양을 시작하고 다음날 반드시 배지 교환을 합니다.

제품주문 및 문의 : 053-811-7081 팩스 : +82-53-811-7096 E-MAIL : wg@clearlab.com
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