"Keratinocyte 연구, 이제 KeraEX SFM 하나면 충분"

KeraEX SFM Kit 

Serum-free keratinocyte medium kit

Catalog Number : RS002-01

Storage Temperature  

KeraEX Serum-free Keratinocyte Basal medium 2~8°C

KeraEX Serum-free Keratinocyte Supplement  -20°C

제품설명  

KeraEX SF Kit는 인간 각질형성세포(human keratinocytes)의 안정적인 배양을 위해 개발된 serum-free 배지 키트로, 기초 배지에 동봉된 supplement들을 첨가하여 사용하는 형태입니다. 

본 제품은 피부 유래 각질형성세포의 부착, 증식 및 형태 유지에 필수적인 생리활성물질을 최적의 농도로 함유하고 있어, 세포를 연속적이고 안정적으로 배양할 수 있도록 설계되었습니다. 

본 키트는 basal medium과 growth supplement로 구성되어 있으며, supplement에는 epidermal growth factor (EGF), insulin, hydrocortisone,

transferrin, epinephrine, bovine pituitary extract (BPE) 등이 포함되어 있습니다.

Supplement는 별도로 제공되기 때문에 사용자의 실험 목적에 따라 유연한 배지 조성이 가능합니다. 

또한, serum-free 조성으로 실험의 재현성을 높이고, 동물 유래 혈청에 따른 lot 간 변동을 최소화하였습니다. 

본 제품은 keratinocyte의 기본적인 배양 외에도, 피부 생물학, 조직공학, 화장품 및 의약품 스크리닝 등 다양한 연구 목적에 활용될 수 있습니다.   

보관 및 안정성 

Keratinocyte basal media는 냉장조건 (2~8°C)에서 보관하여야 하며, supplement는 냉동조건 (-20°C)에서 보관하여야 합니다. Keratinocyte supplement는 빛에 민감하므로 반드시 차광하여 보관합니다. 

Keratinocyte 배지의 변성은 (1) 침전물 또는 부유물, (2) 용액의 탁해짐, (3) 색의 변화, 그리고 (4) pH의 변화 등으로 나타날 수 있습니다. 

추가로 첨가하는 첨가제의 성질에 의해 보관조건 및 배지의 유효 기간이 바뀔 수도 있습니다.

각 제품의 유효기간은 제품 라벨에 표시 되어 있습니다. 

Keratinocyte supplement를 basal media에 첨가한 경우 1개월 이내에 사용해야 합니다. 

생물학적 특성

KeraEX SF Kit의 생물학적 특성은 keratinocyte의 연속 배양 적합성 및 형태 안정성, 세포독성 유무 등을 기준으로 평가합니다.

먼저, 계대 배양 후 세포의 증식 속도와 생존율을 동등한 사양의 타사 배지와 비교하여 분석합니다.

배양 과정에서는 현미경을 활용해 세포의 형태 유지 여부 및 부착력 변화를 지속적으로 관찰합니다.

또한, 세포독성 발생 여부 및 배지에 포함된 supplement 조성에 대한 세포의 생물학적 반응성도 함께 확인합니다. 

사용방법

사용방법 Cell Type: Normal Human Epidermal Keratinocytes (NHEK-Neo and NHEK-Adult cells)

동결 보존된 세포의 해동

1. 세포 배양 배지를 37°C 수조에서 약 30분간 미리 데워줍니다. 

2. 동결 보존 세포를 포함한 cryotube를 액체 질소에서 꺼내는 즉시 37°C 항온 수조에서 재빨리 해동시킵니다. 

3. 해동 시킨 세포에 배양 배지를 섞어준 다음 세포를 원심분리합니다 (1,000 – 1,200 rpm, 5 - 7분). 

4. 상층액을 제거한 후 배양 배지를 넣고 부드럽게 pipetting 해줍니다.

초대 배양 (Primary Culture)

1. 준비된 keratinocyte는 T-75 flask 기준으로 약 3× 10⁶ cells 수준으로 접종하며, KeraEX SF 배지 15 mL를 사용해 배양을 시작합니다. 

2. 37°C, 5% CO₂및 습도가 조절된 인큐베이터에 flask를 넣습니다. 

3. 2~3일 간격으로 배지를 교체해줍니다. 

* 초대 배양의 경우, 세포 증식 속도가 느릴 수 있음.

계대배양 (Sub-culture)

1. 계대는 세포가 70–90% confluence에 도달하고, 형태가 일정하며 생존율이 80% 이상일 때 진행합니다. 

2. 배양 배지를 제거하고 Ca2+와 Mg2+가 없는 DPBS (LB 001-02) 또는 HBSS (LB 003-03, LB 003-04)를 분주해 세포 단층을 씻어 냅니다. 

3. DPBS 또는 HBSS를 제거한 후 Trypsin 또는 Trypsin-EDTA를 처리합니다. 

4. Incubator에 넣고 3~5분간 기다려 세포를 탈착시킵니다. 

5. 배양 배지를 분주하여 탈착된 세포를 모은 다음 계수하여 세포수와 세포생존율을 확인합니다. 

6. 세포를 다시 배지에 재현탁하여 1~3 × 10⁶ cells/flask 수준으로 접종하고 배양을 지속합니다. 

7. 이후에는 2~3일마다 배지를 교체하며, 동일한 조건에서 연속 계대 배양이 가능합니다.